Die Technik, durch die DNA-Einsatzes, die und des Vektors Moleküle mit zwei verschiedenen Restriktionsenzymen erstellen-ergänzende klebrige enden an beiden Enden jedes Fragment Beschränkung, so dass die Insert auf den Vektor in einer bestimmten Ausrichtung eine Ligatur werden und verhindert, dass des Vektors re-circularizing verdaut werden.