Η τεχνική από ποια εισαγωγή DNA και διανύσματος είναι εύπεπτο μορίων με δύο διαφορετικά ένζυμα περιορισμού για τη δημιουργία μη-συμπληρωματικές αυτοκόλλητες άκρα από κάθε άκρη του κάθε τμήματος του περιορισμού, επιτρέποντας έτσι την εισαγωγή για να ligated με το διάνυσμα σε ένα συγκεκριμένο προσανατολισμό και εμποδίζει την re-circularizing το διάνυσμα.