[1] 5´ மற்றும் 3´ நீட்டிப்புகள் (ஒட்டு முடிவடைந்தவுடன்) கொண்ட ஒரு ஒற்றை வரையறை endonuclease செரிமானம் உருவாக்கிய ஒரு டிஎன்ஏ முழுமையற்ற வேண்டிவரும். இருந்தால் இந்த முடிவடைந்தவுடன் annealed மற்றும் ligated, டிஎன்ஏ முழுமையற்ற இருக்கும் இது ஒரு covalently-மூடப்பட்டது வட்டம் மாற்றியது, அல்லது circularized.