Техніка, за які ДНК вставлення та векторних молекул перетравлюються з двох різних ферментів, обмеження для створення-взаємодоповнюючі липким кінцями сягнула кожен фраг обмеження, так що дозволяє вставити, щоб бути ligated до векторної в конкретних орієнтації та, яка запобігає вектор повторно circularizing.