Việc tham gia của hai tuyến tính axit nucleic phân tử bởi sự hình thành của phospho-diester trái phiếu. Trong thí nghiệm nhân bản vô tính, một mảnh hạn chế thường ligated để một phân tử linearized véc tơ bằng cách sử dụng T4 DNA ligase.